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细胞传代方法




一、贴壁细胞传代


1.提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内。


2.吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞。


3.加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用。


4.用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡。


5.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。


二、悬浮细胞传代


1.将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min。


2.弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液。


3.将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。






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